+7 (496) 618-57-75, 616-51-81
+7 (916) 654-54-84
г.Коломна ул. Уманская, д.19А, офис 27
Пн-Пт. 9 00 до 21 00 Сб. 9 00 до 19 00

Ротокан для десен


инструкция по применению для полоскания горла

Ротокан — препарат на основе экстракта растений, натуральное противовоспалительное средство. Раствор помогает при болезненных состояниях, вызванных инфекциями и повреждениями слизистой. Инструкция по применению Ротокана содержит подробное описание способов использования средства местно и внутрь.

Состав препарата и форма выпуска

Производят Ротокан из нескольких лечебных трав в виде темно-бурой жидкости с оранжевым оттенком, специфическим ароматом. Растительные вытяжки получают с помощью раствора спирта в воде.

В составе Ротокана содержатся экстракты:

Раствор Ротокан содержит дубильные вещества, кверцетин, хамазулен, витамины группы В и другие. Этанол усиливает антисептический, противовоспалительный, обезболивающий эффекты растений.

Форма выпуска лекарственного средства — жидкий экстракт, предназначенный для местного применения и употребления внутрь. Раствор содержится в стеклянных флаконах-капельницах или банках (для стационаров) коричневого цвета по 25, 50, 90, 100 и 110 мл.

Лекарственные свойства

Ротокан оказывает комплексное действие. Комбинация биоактивных веществ растений обеспечивает лечебные эффекты Ротокана в стоматологической и ЛОР-практике.

Ингредиенты ромашки обладают противовоспалительным, обезболивающим и спазмолитическим эффектами. Азулены в составе сырья оказывают антиаллергенное и бактериостатическое действие. Календула усиливает противомикробные и другие свойства препарата.

Фитонциды трав губительны для патогенных микроорганизмов. Ликопин, каротиноиды обладают антиоксидантным эффектом, то есть предотвращают разрушение клеток вследствие атаки свободными радикалами.

Ротокан оказывает местное кровоостанавливающее и заживляющее действия, обусловленные флавоноидами, терпеноидами и дубильными веществами тысячелистника.

Лечебные компоненты в составе способствуют остановке кровотечений в ротовой полости. Механизм действия препарата направлен на ускорение свертываемости крови, уменьшение кровотока в пораженном участке слизистой.

Показания

Ротокан в стоматологии, ЛОР-практике используется при воспалении различной этиологии. Причинами боли, опухания, кровоточивости слизистой бывают микробы, повреждения, в том числе ожоги.

Ротокан при стоматите действует на грибковую и бактериальную инфекции. Средство более эффективно на начальном этапе болезни.

Показания к применению Ротокана при стоматологических заболеваниях:

  • афтозный и эрозивный стоматиты в виде язвенных поражений слизистой губ и щек;
  • язвенно-некротический гингивостоматит;
  • инфицирование зубных альвеол;
  • пародонтит;
  • пародонтоз;
  • гингивит.

Препарат используют для полоскания при заболеваниях языка, глотки и гортани. Растительное средство уменьшает проявления воспалительного процесса при глоссите, фарингите, тонзиллите.

Лечение только с помощью Ротокана менее эффективно, чем сочетание полосканий раствором с применением других лекарств и народных средств.

Применение Ротокана внутрь помогает при следующих проблемах пищеварительного тракта:

  • гастрит с пониженной кислотностью желудочного содержимого;
  • энтероколиты различного происхождения;
  • хронический энтерит и колит;
  • функциональная диспепсия;
  • гастродуодениты.

Препарат в гастроэнтерологии назначают в составе комплексной терапии. Помимо употребления внутрь раствора, необходимо принимать спазмолитики, ферментные и другие препараты, соблюдать диету.

Для чего применяется ротокан

Препарат способствует уменьшению болевых ощущений при воспалении слизистых поверхностей верхних дыхательных путей, желудка, прямой кишки. Благодаря применению раствора снижается риск гнойных осложнений. Быстрее происходит эпителизация слизистой.

От чего помогает Ротокан при стоматологических заболеваниях:

  • кровотечение при удалении зуба;
  • повреждения слизистой;
  • инфекция в полости рта;
  • болевые ощущения.

Не все области применения описаны в официальной инструкции к препарату, так как его создали и испытывали только для определенных групп заболеваний. За время использования средства появились новые направления.

Ротокан при флюсе — хороший антисептик для полости рта. Раствором удобно пользоваться дома, на работе, в дороге Использование растительного препарата позволяет сократить прием анальгетиков.

Ротокан при боли в горле — симптоматическое средство, уменьшающее интенсивность местных проявлений воспалительного процесса. Полоскать следует так, чтобы раствор попадал на слизистую глотки и небные миндалины.

Воспаление при остром тонзиллите протекает в небных миндалинах. Полоскание Ротоканом при ангине помогает быстро избавиться от дискомфорта в горле. Быстрее заживает слизистая, восстанавливаются защитные свойства гланд.

Ротокан при фарингите и трахеите в основном используют для ингаляций в безтемпературный период болезни. Такие же процедуры способствуют облегчению дыхания при насморке.

Применяют Ротокан от кашля для лучшего разжижения мокроты в дыхательных путях. Компоненты растительного экстракта активизируют защитные силы организма (иммунитет).

Ротокан в гинекологии используется для сидячих ванночек. Назначают процедуру при воспалительно-инфекционных заболеваниях: молочнице, вагините, кольпите.

В дерматокосметологической практике существуют методики применения Ротокана от прыщей и угрей, мелких повреждений кожи (порезов, ссадин, трещин, язвочек). Средство наносят с целью дезинфекции и стимулирования заживления.

Способы и виды применения средства

Препарат рекомендуется использовать для лечения при начальных признаках заболевания. Ротокан для полоскания горла применяют при первых симптомах ОРЗ, фарингита, ангины:

  • зуде;
  • першении;
  • боли в глотке;
  • осиплости голоса.

Непосредственно перед использованием средства готовят его водный раствор. Способ применения Ротокана для полоскания рта и горла:

  1. Встряхивают флакон с экстрактом.
  2. Отмеряют 1 ч. л. лечебной жидкости.
  3. Добавляют лекарство в теплую воду объемом 200-250 мл.
  4. Раствор в чашке должен иметь температуру 36-37°С.
  5. Сначала ополаскивают рот чистой водой (30 сек.).
  6. Затем полощут разбавленным препаратом (1-2 мин.).
  7. Всего в течение дня требуется 2-3 процедуры (дети старше 12 лет) или 4-5 (взрослые).

Если Ротокан для местных процедур хорошо переносится, увеличивают количество препарата до 2-3 ложек на 200 мл. воды (для взрослых).

Способ подготовки Ротокана для полоскания десен не отличается от описанного выше.

Приготовленный раствор применяют для аппликаций при заболеваниях слизистой ротовой полости. Смачивают салфетку из стерильного бинта и прикладывают к пораженному участку на внутренней поверхности щек или к деснам на 15-20 минут.

Используют Ротокан после удаления зуба при заболеваниях пародонта. В десневые карманы или в лунку на месте удаленного зуба вводят тонкие турунды, смоченные раствором препарата. Длительность воздействия 20 минут, кратность применения — 1 раз в сутки. Всего проводят 4-6 процедур.

Применяют Ротокан для ингаляций небулайзером при инфекционных заболеваниях: ОРЗ, ангине, фарингите, трахеите. Для приготовления рабочего раствора потребуется 1/2 ч. л. (2.5 мл.) средства на 100 мл. физиологического раствора (покупают в аптеке). Выполняют ингаляции 2-7 дней, пока сохраняются симптомы болезни.

В гастроэнтерологии Ротокан назначают для приема водного раствора внутрь:

  1. 1 ч. л. препарата развести в 200 мл. воды.
  2. Пить по половине стакана.

Принимают средство за полчаса до приема пищи от 3 до 4 раз день. Можно пить раствор спустя 40-60 минут после еды. Курс — от 2 до 3 недель.

Для микроклизм при воспалении толстой кишки применяют 50-100 мл. разведенного в воде препарата (чайная ложка на стакан воды).

Перед процедурой делают очистительную клизму. Кратность 1-2 раза в день. Курс — до 6 дней.

Ротокан для лечения заболеваний кожи применяют в чистом виде. Ватную палочку смачивают экстрактом, точечно наносят на угри, прыщи, ранки, ссадины.

Если приготовить раствор 2 ч. л. в неполном стакане воды, то получится антисептическое средство, тоник жирной и комбинированной кожи, склонной к угревой сыпи.

Противопоказания, побочные действия, передозировка

Ротокан не назначается лицам, у которых диагностирована индивидуальная гиперчувствительность к отдельным компонентам экстракта или к препарату в целом. Среди ингредиентов присутствует этанол — около 30 мл. в каждых 100 мл. экстракта.

  • В связи с наличием спирта противопоказаниями Ротокана являются алкоголизм, тяжелые заболевания и травмы головного мозга.
  • Не назначают Ротокан при беременности, тяжелой почечной и печеночной недостаточности.
  • Возрастное ограничение — возраст менее 18 лет.
  • Противопоказан Ротокан при грудном вскармливании.

Детские дозировки в инструкции не указаны. Иногда дают раствор Ротокана детям старше 12 лет для полоскания, ингаляций, но только после консультации с педиатром.

Среди нежелательных эффектов препарата — аллергические реакции в виде:

  • покраснения;
  • зуда кожи;
  • высыпаний;
  • тошноты;
  • рвоты.

При передозировке может появиться головокружение. Признаки будут похожи на состояние при алкогольном опьянении. Необходимо прекратить употребление экстракта, промыть желудок.

Аналоги препарата

Лекарство Ротокан — уникальное по составу. Среди полных аналогов можно назвать препарат Ротокан Вилар. Средство имеет точно такой же состав и показания.

Другие аналоги Ротокана по механизму действия отличаются составом и тем, что не предназначены для употребления внутрь. Это Мирамистин, Хлоргексидин. Ротокан при тонзиллите заменяют Стоматидином, Йодинолом.

Применяют при тех же заболеваниях аэрозоли и спреи Стопангин, Гексорал. Ротокан при воспалении десен и сходных проблемах ротовой полости заменяют Мараславином или Стоматидином.

По сравнению почти со всеми перечисленными средствами Ротокан дешевле в 3 раза.

Аналоги по механизму действия для применения в гастроэнтерологии: Лечебно-профилактический сбор №3, Гастрофлокс-фиточай. Учитывайте, что составы препаратов отличаются, различными будут и списки показаний, способы применения.

Отзывы

Во многих отзывах о Ротокане отмечается, что это средство хорошо помогает при лечении стоматитов и больного горла.

Мария, 24 года:

«Для меня настойка Ротокан стала спасением и «оружием» в борьбе за здоровье десен и кожи. Препарат помогает «распрощаться» со стоматитом за 2-3 дня. Это средство эффективно против акне. Использую точечно, с помощью ватной палочки наношу только на прыщи. Быстро проходят краснота и воспаление».

Ирина, 43 года:

«Горло болит часто, перепробовала много спреев и народных средств. Ротокан очень эффективен! Горло перестает болеть уже на следующий день после 4-5 полосканий».

Михаил, 35 лет:

«Для меня Ротокан — средство «от всего». Прижигаю им порезы после бритья, полощу горло, если першит и болит».

Ротокан — фитопрепарат, оказывающий местное противовоспалительное и антисептическое действие. Средство повышает локальный иммунитет, улучшает питание и заживление слизистой дыхательных путей и полости рта.

Препарат наиболее эффективен в начальном периоде инфекционного и воспалительного процесса.

Как отбеливать зубы в домашних условиях, читайте тут.

Будьте здоровы!

GitHub - протокол буферы / protobuf: буферы протокола

перейти к содержанию Зарегистрироваться
  • Почему именно GitHub? Особенности →
    • Обзор кода
    • Управление проектами
    • Интеграции
    • Действия
    • Пакеты
    • Безопасность
    • Управление командой
    • Хостинг
    • мобильный
    • Истории клиентов →
    • Безопасность →
  • Команда
.

Протокол получения первичной культуры микроглии

Аннотация

Первичная микроглия, как в монокультуре, так и в совместной культуре с нейронами или астроцитами, является мощным инструментом для изучения механизмов, лежащих в основе воспалительных реакций микроглии и взаимодействий, специфичных для типов клеток в центральной нервной системе (ЦНС). Этот протокол предоставляет подробную информацию о том, как подготовить первичную микроглию высокой чистоты из новорожденных детенышей мыши.Общие шаги включают диссоциацию клеток головного мозга, смешанную культуру глиальных клеток и выделение микроглии.

Предпосылки

В последние годы нейровоспаление стало одной из основных областей нейробиологических исследований. Воспалительные реакции, такие как активация глии и активация цитокинов, наблюдались в головном мозге пациентов с различными неврологическими заболеваниями (Fan et al ., 2015; Koshimori et al ., 2015; Гарден и Кэмпбелл, 2016). Нейровоспаление считается не только следствием патологических изменений в головном мозге, но и фактором прогрессирования заболевания (Schwartz et al ., 2013). Кроме того, физиологические функции воспалительных путей, важность которых ранее недооценивалась, оказались удивительно разнообразными. Например, активация сигнального пути комплемента обычно наблюдается в центральной нервной системе (ЦНС) при неврологических заболеваниях и, как предполагается, вовлечена в патофизиологию заболевания (Michailidou et al ., 2015; Loeffler et al ., 2008). Теперь мы знаем, что он также играет важную роль в онтогенетической регуляции синаптической очистки (Stevens et al ., 2007). Наряду с повышенным вниманием к воспалению, продолжает расти интерес к функции микроглии во время развития, нейропротекции и патогенезу. Микроглия - это резидентные клетки врожденного иммунитета миелоидного происхождения, расположенные в головном мозге, и являются критическими компонентами иммунной системы ЦНС. Активация микроглии при некоторых неврологических заболеваниях может напрямую участвовать в патогенных процессах.Например, мутации TREM2, которые затрагивают только микроглию, являются генетическим фактором риска болезни Альцгеймера (Yuan et al ., 2016; Wang et al ., 2015). В то же время раскрывается роль микроглии в развитии. Например, для созревания синапсов на раннем этапе развития требуется микроглия, и эта регуляция может подчеркивать патогенез таких заболеваний, как аутизм (Edmonson et al ., 2016; Stephan et al ., 2012). Инструменты для изучения микроглии включают моделей in vivo ( e.г. , мыши с дефицитом PU.1 в микроглии [McKercher et al ., 1996]) и in vitro системы , такие как иммортализованные линии клеток микроглии и первичная культура микроглии. В то время как инструменты in vivo являются мощными для демонстрации систематической функции микроглии, инструменты in vitro идеально подходят для механистической характеристики из-за легкого манипулирования экспериментальными факторами. По сравнению с иммортализованными линиями клеток микроглии, первичная микроглия лучше имитирует in vivo свойства микроглии (Stansley et al ., 2012). Измененная экспрессия генов при стимуляции может быть лучше представлена ​​в первичной микроглии, чем в линиях микроглиальных клеток (Stansley et al ., 2012; Henn et al ., 2009). Здесь мы описали протокол для создания первичной культуры микроглии высокой чистоты, полученной из новорожденных мышей, и этот метод дал надежные результаты в нашей работе (Lian et al ., 2016). Диссоциированные клетки собирают путем ферментативного переваривания собранного мозга и засевают для выращивания смешанной глиальной культуры.Микроглия, растущая на поверхности сливающегося слоя астроцитов, очищается путем механического отбора смешанной глиальной культуры.

Материалы и реагенты

  1. Центрифужные пробирки 15 мл (Corning, номер по каталогу: 430052)
  2. Центрифужные пробирки на 50 мл (Corning, номер по каталогу: 430290)
  3. 12-луночные планшеты (Corning, Costar ® , номер по каталогу: 3737)
  4. Новорожденные щенки (мышь, P0-P2)
  5. Поли-D-лизин (PDL) (Sigma-Aldrich, номер по каталогу: P6407-5MG)
  6. Этанол
  7. Среда Игла, модифицированная Дульбекко (DMEM) (Thermo Fisher Scientific, Gibco TM , номер по каталогу: 11995065)
  8. Фетальная бычья сыворотка (FBS) (GE Healthcare, Hyclone TM , каталожный номер: Sh40088.03)
  9. 10000 Ед / мл пенициллин-стрептомицин (Pen / Strep) (Thermo Fisher Scientific, Gibco TM , номер по каталогу: 15140122)
  10. Сбалансированный солевой раствор Хэнкса (HBSS) (Thermo Fisher Scientific, Gibco TM , номер по каталогу: 24020117)
  11. 1 M буферный раствор HEPES (Thermo Fisher Scientific, Gibco TM , номер по каталогу: 15630080)
  12. Глюкоза (Thermo Fisher Scientific, Fisher Scientific, номер по каталогу: D16-3)
  13. Трипсин, порошок (Thermo Fisher Scientific, Gibco TM , номер по каталогу: 27250018)
  14. Ингибитор трипсина (Sigma-Aldrich, каталожный номер: T6522-100MG)
  15. Дезоксирибонуклеаза I (ДНКаза I) (Sigma-Aldrich, номер по каталогу: DN25-100MG)
  16. Питательная среда (500 мл) (см. Рецепты)
  17. Среда для расслоения (500 мл) (см. Рецепты)
  18. 2.5% трипсин (20 мл) (см. Рецепты)
  19. 1 мг / мл ингибитора трипсина (20 мл) (см. Рецепты)
  20. 10 мг / мл ДНКазы (20 мл) (см. Рецепты)

Оборудование

  1. Колба для культивирования Т-75 с вентилируемой крышкой (Corning, каталожный номер: 3276)
  2. Инструменты для рассечения
    1. Тонкие ножницы (Fine Science Tools, каталожный номер: 14060-09)
    2. Пружинные ножницы (Fine Science Tools, каталожный номер: 15009-08)
    3. Изогнутые стандартные пинцеты (Fine Science Tools, каталожный номер: 11052-10)
    4. Тонкие щипцы (Fine Science Tools, каталожный номер: 11370-40)
  3. Центрифуга (Eppendorf, модель: 5702)
  4. Гемоцитометр
  5. Вытяжной вентилятор (Thermo Fisher Scientific, Thermo Scientific TM , номер по каталогу: 1323)
  6. CO 2 инкубатор для культур клеток (Thermo Fisher Scientific, Thermo Scientific TM , номер по каталогу: 50144906)
  7. Водяная баня 37 ° C (Thermo Fisher Scientific, Thermo Scientific TM , модель: TSGP02)

Процедура

В зависимости от дизайна эксперимента количество клеток микроглии, необходимое для экспериментов, варьируется.Ниже мы перечисляем этапы обработки 3 новорожденных детенышей мыши для создания смешанных глиальных культур в двух колбах Т-75. В смешанной культуре астроциты образуют сплошной клеточный слой внизу, а микроглия растет наверху астроцитарного слоя. Общее количество первичной микроглии, созданной из двух колб Т-75, должно быть достаточным для засева четырех 12-луночных планшетов с плотностью 50 000 клеток / см 2 .

  1. Покройте две колбы для культивирования Т-75 с 7 мл каждая из 10 мкг / мл PDL в течение 2 часов. Перед использованием промойте дно колбы дистиллированной водой 3 раза.
    Примечание. Вы можете покрыть больше колб, чем необходимо, а неиспользованные колбы с покрытием можно хранить при 4 ° C в течение нескольких месяцев. Обычно мы храним колбы в полиэтиленовой пленке, чтобы избежать загрязнения.
  2. Собирайте новорожденных щенков из клеток для разведения. Держите щенков на нагревательной пластине 37 ° C, чтобы поддерживать температуру тела. А пока подготовьте инструменты и реагенты, необходимые для эксперимента с культурой. Распылите инструменты для препарирования и рабочее пространство 75% этанолом. Нагрейте питательную среду (№ 16 в разделе «Материалы и реагенты» и №1 в разделе «Рецепты») на водяной бане с температурой 37 ° C.


    Рисунок 1. Процесс новорожденных детенышей мыши для первичной культуры микроглии. (a) Отрежьте голову щенка тонкими ножницами. (b) Тонкими ножницами разрежьте кожу головы по средней линии от заднего конца до средней точки между двумя глазами. (c) Когда был обнажен тонкий череп, поместите один конец тонких щипцов под череп, но над мозговой тканью, и потяните к морду по средней линии, чтобы мозг можно было легко извлечь с помощью изогнутых щипцов.

  3. Снимите щенков с нагревательной пластины. Обезглавьте и поместите головы в чашку Петри диаметром 6 см, содержащую 5 мл среды для холодного препарирования (рис. 1a) (№ 17 в «Материалы и реагенты» и № 2 в «Рецептах»). Используйте тонкие ножницы, чтобы разрезать кожу головы по средней линии, начиная с задней части и заканчивая возле морды (рис. 1b). Поместите один острый кончик тонких щипцов под череп на заднем конце мозга и разрежьте череп, проталкивая конец от заднего к переднему (рис. 1c).Выньте мозг с помощью изогнутых щипцов и погрузите мозг в 5 мл холодной среды для диссекции в новую чашку Петри.
    Примечание: новорожденные щенки имеют прозрачный и мягкий череп. Если разрезать череп ножницами, можно повредить находящуюся под ним хрупкую ткань мозга.
  4. Поместите чашку Петри, содержащую мозг, под микроскопом для препарирования. Осторожно удалите мозговые оболочки (читатели могут обратиться к видео, представленному Bowyer et al ., 2012 для этого шага) и собрать кору и гиппокамп.Если использовать 3 щенка, получится 6 половинок. Поместите по 3 половинки на чашку Петри с 5 мл среды для рассечения и измельчите ткань на мелкие кусочки с помощью пружинных ножниц.
  5. Перенести содержимое каждой чашки в пробирку на 50 мл. Вымойте чашку средой для рассечения, чтобы собрать оставшуюся ткань на чашке, и повторите перенос. Заполните пробирку на 50 мл, чтобы получить конечный объем среды для рассечения 30 мл.
  6. Добавьте 1,5 мл 2,5% трипсина в каждую пробирку и инкубируйте на водяной бане при 37 ° C в течение 15 мин.Часто кружите.
  7. Добавьте 1,2 мл 1 мг / мл ингибитора трипсина и инкубируйте в течение 1 мин. Добавьте 750 мкл 10 мг / мл ДНКазы для переваривания липкой ДНК, высвобожденной из мертвых клеток.
  8. Центрифугируйте пробирку при 400 x g в течение 5 мин. Аспирируйте супернатант и растереть осадок с 5 мл теплой питательной среды с помощью наконечника пипетки на 1 мл. Перенести гомогенную суспензию клеток в пробирку на 15 мл. Если остаются недиссоциированные кусочки ткани, дайте им осесть и повторите этап растирания и переноса, используя 3 мл среды.
  9. Центрифугируйте пробирки на 15 мл при 400 x g в течение 5 мин. Аспирируйте супернатант и ресуспендируйте осадок с 5 мл подогретой питательной среды.
  10. Подсчитайте плотность клеток с помощью гемоцитометра.
  11. Поместите каждую пробирку с клетками в одну покрытую колбу Т-75 с плотностью 50 000 клеток / см 2 . Добавьте питательную среду, чтобы достичь объема 15 мл в колбах. Поместите колбы с посевом в инкубатор для культур клеток CO 2 с 5% CO 2 , 100% влажностью при 37 ° C.
  12. На следующий день меняйте питательную среду, чтобы удалить остатки клеток, а затем меняйте питательную среду каждые 5 дней.
  13. Через 5-7 дней астроциты на дне колбы образуют слой сливающихся клеток (рис. 2). Микроглия и некоторые олигодендроциты растут поверх астроцитарного слоя.


    Рис. 2. Астроциты образуют соединительный сливной слой на дне смешанной глиальной культуры. Стрелки указывают на типичные астроциты. Масштабная линейка = 100 мкм.

  14. Чтобы собрать микроглию, энергично постучите по колбам на столе и соберите плавающие клетки в кондиционированной культуральной среде (нет необходимости менять среду перед постукиванием). Полученные клетки представляют собой очищенную микроглию. Используйте гемоцитометр, чтобы подсчитать плотность плавающих клеток и засеять клетки при 50 000 клеток / см 2 в культуральных сосудах, покрытых PDL. Через 2 часа проверьте под микроскопом, что микроглия прикрепилась ко дну. Аспирируйте среду и замените свежей питательной средой.Клетки микроглии готовы к использованию на следующий день (рис. 3).


    Рис. 3. Очищенная первичная культура микроглии. Клетки окрашивали микроглиальным маркером белка Iba1. Было сделано фазово-контрастное изображение, чтобы показать тело клетки. Масштабная линейка = 50 мкм.

Анализ данных

Получение первичной культуры микроглии хорошего качества является основой для таких экспериментов, как фагоцитоз, анализ РНК и белков при различных обработках, а также иммуноцитохимическое окрашивание.Однако статистический анализ экспериментов после первичной культуры микроглии выходит за рамки этого протокола, и поэтому процесс анализа данных здесь не обсуждается.

Заметки

  1. В этом протоколе описан препарат микроглии от новорожденных детенышей (P0-P2). Можно использовать и более старых детенышей, поскольку глиальные клетки не являются постмитотическими, как нейроны, но новорожденные детеныши дают лучший урожай.
  2. Большую часть процедуры следует проводить в стерильном вытяжном шкафу.Исключения включают обращение с детенышами, рассечение мозга, центрифугирование и подсчет клеток. Используйте стерильные пробирки и посуду. Обработайте инструменты и внешнюю поверхность пробирок и посуды 70% этанолом, прежде чем переносить их в вытяжку. За исключением инкубации при 37 ° C в водяной бане и инкубаторе для культур, все этапы выполняются при комнатной температуре и должны выполняться своевременно, чтобы повысить жизнеспособность клеток.
  3. Если смешанные глиальные клетки достигают слияния, но микроглиальные клетки не нужны немедленно, смешанную глиальную культуру можно пассировать.Смешанные глиальные культуры также можно замораживать и хранить в течение длительного времени в замораживающей среде, состоящей из DMEM с 20% FBS и 10% DMSO в жидком азоте. Когда новый пассаж или восстановленные замороженные клетки достигают слияния, микроглия может расти поверх слоя сливающихся клеток и очищаться постукиванием.
  4. Астроциты и микроглия растут более энергично, чем олигодендроциты в этих условиях культивирования. После отбора смешанной глиальной культуры собранные плавающие клетки могут содержать некоторые олигодендроциты.Однако клетки микроглии обладают гораздо большей способностью к прикреплению, чем олигодендроциты. После посева плавающих клеток микроглия прикрепляется к дну культурального сосуда гораздо эффективнее, чем олигодендроциты. Через 2 часа после посева перед добавлением свежей среды аспирация старой среды удалит неприкрепленные контаминирующие олигодендроциты.

Рецепты

  1. Питательная среда (500 мл)
    450 мл DMEM
    50 мл FBS
    По желанию вы можете добавить 5 мл Pen / Strep
    Filter и хранить при 4 ° C
  2. Среда для расслоения (500 мл)
    450 мл 1x HBSS
    5 мл 1 M HEPES
    3 г порошка глюкозы
    5 мл раствора Pen / Strep
    Отфильтровать и хранить при 4 ° C
  3. 2.5% трипсин (20 мл)
    0,5 г порошка трипсина, растворенного в 20 мл HBSS
    Фильтровать, аликвотировать и хранить при -20 ° C
  4. 1 мг / мл ингибитора трипсина (20 мл)
    0,02 г ингибитора трипсина
    Фильтровать, аликвотировать и хранить при -20 ° C
  5. 10 мг / мл ДНКазы (20 мл)
    0,2 г порошка ДНКазы I, растворенного в 20 мл HBSS
    Фильтровать, отбирать аликвоты и хранить при -20 ° C

Благодарности

Мы благодарим R01 от NIH (AG032051, AG020670 и NS076117 до H.З.) за поддержку этой работы.

Ссылки

  1. Бойер, Дж. Ф., Томас, М., Паттерсон, Т. А., Джордж, Н. И., Раннеллс, Дж. А. и Леви, М. С. (2012). Визуальное описание рассечения сосудистой сети на поверхности головного мозга и связанных мозговых оболочек и сосудистого сплетения от мозга крысы. J Vis Exp (69): e4285.
  2. Эдмонсон, К. А., Зиатс, М. Н., Реннерт, О. М. (2016). Невоспалительная роль микроглии при расстройствах аутистического спектра. Передний Neurol 7: 9.
  3. Фан, З., Окелло, А. А., Брукс, Д. Дж., Эдисон, П. (2015). Продольное влияние активации микроглии и амилоида на функцию нейронов при болезни Альцгеймера. Мозг 138 (Pt 12): 3685-3698.
  4. Гарден, Г. А. и Кэмпбелл, Б. М. (2016). Глиальные биомаркеры при заболеваниях центральной нервной системы человека. Глия 64 (10): 1755-1771.
  5. Хенн, А., Лунд, С., Хедтьярн, М., Шраттенхольц, А., Порцген, П. и Лейст, М. (2009). Пригодность клеток BV2 в качестве альтернативной модельной системы для первичных культур микроглии или для экспериментов на животных, исследующих воспаление мозга. ALTEX 26 (2): 83-94.
  6. Кошимори, Ю., Ко, Дж. Х., Мизрахи, Р., Русян, П., Мабрук, Р., Джейкобс, М. Ф., Кристофер, Л., Хамани, К., Ланг, А. Э., Уилсон, А. А., Хоул, С. и Strafella, AP (2015). Визуализация активации микроглии полосатого тела у пациентов с болезнью Паркинсона. PLoS One 10 (9): e0138721.
  7. Леффлер Д. А., Кэмп Д. М. и Беннетт Д. А. (2008). Активация бляшек и когнитивная потеря при болезни Альцгеймера. Дж Нейровоспаление 5: 9.
  8. Лиан, Х., Литвинчук, А., Чанг, А.С., Аитмитти, Н., Янковский, Дж. Л. и Чжэн, Х. (2016). Перекрестная связь астроцитов и микроглии посредством активации комплемента модулирует амилоидную патологию на мышиных моделях болезни Альцгеймера. J Neurosci 36 (2): 577-589.
  9. Маккерчер, С.Р., Торбетт, Б. Э., Андерсон, К. Л., Хенкель, Г. У., Вестал, Д. Дж., Барибо, Х., Клемс, М., Фини, А. Дж., Ву, Г. Э., Пейдж, К. Дж. И Маки, Р. А. (1996). Целенаправленное нарушение гена PU.1 приводит к множественным аномалиям кроветворения. EMBO J 15 (20): 5647-5658.
  10. Михайлиду, И., Виллемс, Дж. Г., Куи, Э. Дж., Ван Иден, К., Голд, С. М., Гертс, Дж. Дж., Баас, Ф., Уитинга, И. и Рамалья, В. (2015). Комплемент C1q-C3-ассоциированные синаптические изменения в гиппокампе при рассеянном склерозе. Энн Нейрол 77 (6): 1007-1026.
  11. Шварц, М., Кипнис, Дж., Ривест, С. и Прат, А. (2013). Как иммунные клетки поддерживают и формируют мозг в условиях здоровья, болезней и старения? J Neurosci 33 (45): 17587-17596.
  12. Стивенс, Б., Аллен, Нью-Джерси, Васкес, Л. Е., Хауэлл, Г. Р., Кристоферсон, К. С., Нури, Н., Мичева, К. Д., Мехалоу, А. К., Хуберман, А. Д., Стаффорд, Б., Шер, А., Литке, AM, Lambris, JD, Smith, SJ, John, SW и Barres, B.А. (2007). Классический каскад комплемента опосредует удаление синапсов ЦНС. Ячейка 131 (6): 1164-1178.
  13. Стефан А. Х., Баррес Б. А. и Стивенс Б. (2012). Система комплемента: неожиданная роль в сокращении синапсов во время развития и болезни. Анну Рев Neurosci 35: 369-389.
  14. Стэнсли Б., Пост Дж. И Хенсли К. (2012). Сравнительный обзор систем клеточных культур для изучения биологии микроглии при болезни Альцгеймера. J Нейровоспаление 9: 115
  15. Ван, Ю., Селла, М., Маллинсон, К., Ульрих, Дж. Д., Янг, К.Л., Робинетт, М.Л., Гилфиллан, С., Кришнан, Г.М., Судхакар, С., Зинсельмейер, Б.Х., Хольцман, Д.М., Чиррито , JR и Колонна, М. (2015). Чувствительность липидов TREM2 поддерживает микроглиальный ответ в модели болезни Альцгеймера. Ячейка 160 (6): 1061-1071.
  16. Юань, П., Конделло, К., Кин, К. Д., Ван, Ю., Берд, Т. Д., Пол, С. М., Ло, В., Колонна, М., Баддели, Д., Груцендлер, Дж. (2016). Гаплодефицит TREM2 у мышей и людей нарушает барьерную функцию микроглии, что приводит к снижению уплотнения амилоида и тяжелой аксональной дистрофии. Нейрон 90 (4): 724-739.
Пожалуйста, войдите или зарегистрируйтесь, чтобы просмотреть полный текст

Просмотр полного текста

Скачать PDF

Вопросы и ответы

Авторские права: © 2016 Авторы; эксклюзивный лицензиат ООО «Биопротокол».

Как цитировать: Читатели должны цитировать как статью о биопротоколе, так и исходную исследовательскую статью, в которой использовался этот протокол:
  1. Lian, H., Roy, E. and Zheng, H. (2016). Протокол приготовления первичной культуры микроглии. Биопротокол 6 (21): e1989. DOI: 10.21769 / BioProtoc.1989.
  2. Лиан, Х., Литвинчук, А., Чан, А.С., Аитмитти, Н., Янковский, Дж. Л. и Чжэн, Х. (2016). Перекрестная связь астроцитов и микроглии посредством активации комплемента модулирует амилоидную патологию на мышиных моделях болезни Альцгеймера. J Neurosci 36 (2): 577-589.
.

xtaci / kcp-go: крипто-безопасная, надежная библиотека UDP промышленного уровня для golang с FEC

перейти к содержанию Зарегистрироваться
  • Почему именно GitHub? Особенности →
    • Обзор кода
    • Управление проектами
    • Интеграции
    • Действия
    • Пакеты
    • Безопасность
    • Управление командой
    • Хостинг
    • мобильный
    • Истории клиентов →
    • Безопасность →
  • Команда
  • Предприятие
  • Проводить исследования
    • Изучить GitHub →
    Учитесь и вносите свой вклад
    • Темы
    • Коллекции
.

О нас | Протокол по парниковым газам

Перейти к основному содержанию Около О протоколе GHG О WRI и WBCSD Наша команда Компании и организации Страны и города Страновые программы Спонсоры Связаться с нами Стандарты .

Смотрите также

Фотогалерея

Контакты

Клиника Эстетической Стоматологии
"Дента-Профи"
Адрес: г. Коломна, ул. Уманская д.19А, офис 27
Тел.: +7 (496) 618-57-75, +7 (916) 654-54-84
E-mail: [email protected]
Часы работы: Пн-Пт. 9 00 до 21 00
Сб. 9 00 до 19 00